Реакция агглютинации (РА)

Агглютинация - это склеивание и выпадение в осадок бактерий либо других клеток под действием антител в присутствии электролита (изотонического раствора хлорида натрия). Группы склеенных микробов (клеток) именуют агглютинатом. Для реакции агглютинации нужны последующие составляющие:

1. Антитела (агглютинины), которые находятся в сыворотке хворого либо иммунного животного.

2. Антиген - взвесь живых либо убитых бактерий, эритроцитов Реакция агглютинации (РА) либо других клеток.

3. Изотонический (0,9%) раствор хлорида натрия.

Реакцию агглютинации для серодиагностики используют при брюшном тифе и паратифах (реакция Видаля), при бруцеллезе (реакция Райта и Хеддлсона), туляремии и т.д. Антителом при всем этом является сыворотка хворого, а антигеном узнаваемый микроорганизм. При идентификации бактерий либо других клеток антигеном служит Реакция агглютинации (РА) их взвесь, а антителом - популярная иммунная сыворотка. Эту реакцию обширно используют для диагностики пищеварительных зараз, коклюша и др.

Способы постановки РА


Приблизительная РА на стекле

Развернутая РА

(большой способ)

Реакция коагглютинации

Развернутая РА на стекле (сероидентификация)

Реакция агглютинации на стекле. На обезжиренное предметное стекло наносят две капли специфичной (адсорбированной) сыворотки и каплю изотонического раствора хлорида Реакция агглютинации (РА) натрия. Неадсорбированные сыворотки за ранее разводят в соотношении 1:5 - 1:100. Капли на стекло нужно наносить так, чтоб меж ними было расстояние. Культуру петлёй либо пипеткой кропотливо растирают на стекле, а позже заносят в каплю изотонического, раствора хлорида натрия и в одну из капель сыворотки, размешивая в каждой до образования гомогенной взвеси. Капля Реакция агглютинации (РА) сыворотки, в которую не внесена культура, является контролем сыворотки.

Внимание! Нельзя переносить культуру из сыворотки в каплю изотонического раствора хлорида натрия, которая является контролем антигена. Реакция протекает при комнатной температуре в течение 1-3 мин. Если контроль сыворотки остаётся прозрачным, в контроле антигена наблюдается равномерная муть, а в капле, где культура Реакция агглютинации (РА) смешана с сывороткой, возникают хлопья агглютината на фоне прозрачной воды, итог реакции считается положительным.


Диагностическая Физиологический

сыворотка +культура раствор + культура

Развёрнутая реакция агглютинации (большой способ). Готовят поочередные, в большинстве случаев двукратные, разведения сыворотки. Способ именуют объёмным. Для определения титра антител в сыворотке крови возьмите 6 пробирок. В первую пробирку налейте Реакция агглютинации (РА) 1 мл начального разведения сыворотки 1:50 и во все 6 пробирок градуированной пипеткой занесите по 1 мл физиологического раствора. В первой пробирке получится разведение сыворотки 1:100 при объёме 2 мл. Из первой пробирки 1 мл перенесите во вторую пробирку, где разведение станет 1:200. Так сделайте ряд поочередных разведений сыворотки в 5 первых пробирках (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600). Из пятой пробирки 1 мл Реакция агглютинации (РА) вылейте в антисептический раствор. Во все 6 пробирок добавьте по 2 капли диагностикума. Шестая пробирка является контролем культуры, потому что содержит только физиологический раствор и диагностикум.

Ингредиенты номер пробирки
контроль сыворотки контроль диагности-кума
Физиологический 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0
раствор
Сыворотка хворого в 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 -
разведении 1:50
Диагностикум (капли) -
Разведение сыворотки 1:100 1:200 1:400 1:800 1:1600 1:100 -

Таковой контроль нужен для исключения спонтанной агглютинации Реакция агглютинации (РА) культуры. Пробирки встряхивают и помещают в термостат при температуре 37°С на 2 часа, а потом оставляют на день при комнатной температуре, после этого создают учёт результатов реакции агглютинации. При постановке реакции агглютинации с сыворотками малышей первых месяцев жизни в связи с многофункциональной неполноценностью антителообразования нужно выявление более низких титров антител, что учитывается при Реакция агглютинации (РА) разведении сыворотки. Начальное разведение сыворотки берут 1:25. В первой пробирке получают разведение 1:50, потом 1:100 и т.д.

При положительном итоге реакции в пробирках видны склеевшиеся клеточки в виде зернышек либо хлопьев на фоне прозрачной воды. Агглютинат равномерно оседает на дно в виде «зонтика», а жидкость над осадком просветляется. Контроль антигена умеренно Реакция агглютинации (РА) мутный.

По нраву осадка различают мелко- и крупнозернистую (хлопьевидную) агглютинацию. Тонкодисперсная агглютинация выходит при работе с О-сыворотками. Крупнозернистая - при содействии подвижных бактерий со жгутиковыми Н-сыворотками. Она наступает резвее тонкодисперсной, образующийся при всем этом осадок очень рыхловатый и просто разбивается.

Интенсивность реакции выражается последующим образом Реакция агглютинации (РА):

++++ все клеточки осели, жидкость в пробирке совсем прозрачна. Итог реакции резко положительный;

+++ осадок меньше, нет полного просветления воды. Итог реакции положительный;

++ осадок еще меньше, жидкость мутнее. Итог реакции непонятный;

на деньке пробирки малозначительный осадок, жидкость мутная. Непонятный итог реакции;

- осадка нет, жидкость умеренно мутная, как в контроле антигена. Плохой Реакция агглютинации (РА) результат реакции

К работе № 2


reakcii-na-kation-serebra.html
reakcii-nukleofilnogo-zamesheniya-galogenproizvodnih.html
reakcii-obrazovaniya-krupnih-immunnih-kompleksov.html